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简介:
    体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具,也是我们在实验室中改造、优化基因的常用的手段。根据突变需要,向目的基因片段中引入任何可能的DNA变异,包括一段碱基的添加、删除、替换等。
操作流程:
  1、要对您的原始质粒进行测序反应,以验证该质粒与提供的原始序列是否一致;
  2、设计合成变异导入Primer和对应PCR用Primer的5′碱基的互补碱基必须和变异导入Primer的5′碱基相邻接;
  3、进行PCR扩增(使用高保真DNA聚合酶);
  4、对PCR产物进行末端平滑及5′末端磷酸化反应,然后进行自身连接反应;
  5、将连接产物转化大肠杆菌,挑选转化子进行测序鉴定。
服务要求:
1.客户定点突变所需的质粒(>100ng/ul)40ul以上,新鲜的甘油菌液;
2.引物:质粒的相关信息(图谱、序列、大小、抗性等);突变的位置和序列。
结果提供:
详细的实验步骤、突变好的质粒和甘油菌、测序彩图及相关数据。


 

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