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简介:

酵母的转录激活因子GAL4由两个可以分开的、功能上相互独立的结构域(domain)组成,N端有一个由147个氨基酸组成的DNA结合域(DNA binding domain,BD),C端有一个由113个氨基酸组成的转录激活域(transcription activation domain,AD)。BD可以和上游激活序列(upstream activating sequence,UAS)结合,而AD则能激活UAS下游的基因进行转录。但是,单独的BD或AD不能激活基因转录,它们之间只有通过某种方式结合在一起才具有完整的转录激活因子的功能。酵母双杂交系统主要利用酵母的GAL4的这个特性通过两个杂交蛋白在酵母细胞中的相互结合及对报告基因的转录激活来研究活细胞内蛋白质的相互作用,对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因敏感地检测到。酵母双杂交技术不仅应用于哺乳动物蛋白质之间的相互作用研究,还可以用来研究高等植物蛋白质之间的相互作用。

基于酵母双杂交技术平台的特点,它已经被应用在许多研究工作中,包括:①用已知功能的蛋白基因筛选双杂交cDNA文库,以研究蛋白质之间相互作用的传递途径;②分析新基因的生物学功能。即以功能未知的新基因去筛选文库。然后根据钓到的已知基因的功能推测该新基因的功能;③筛选药物的作用位点以及药物对蛋白质之间相互作用的影响;④检验一对功能已知蛋白间的相互作用;⑤在细胞体内研究抗原和抗体的相互作用等等。

 

操作流程:

目前我们可提供适用于浆蛋白、核蛋白及膜蛋白酵母双杂交实验服务的两套系统,包括:Clontech GAL4-based two-hybridsystem适用于诱饵蛋白为浆蛋白、核蛋白

StratageneCytotrapPsos system 适用于诱饵蛋白为膜蛋白
基本操作流程:

  1. 蛋白质两两之间相互作用的实验

内容包括:

1)基因克隆的获得及DNA测序检验;

2)基因的酵母双杂交载体构建及其DNA测序检验;

3)每个基因克隆的酵母双杂交自激活检验;

4)酵母细胞内的相互作用验证

 

2、蛋白质与文库相互作用的实验

内容包括:

1)诱饵基因克隆的获得及DNA测序检验;

2)诱饵基因的酵母双杂交载体构建及其DNA测序检验;

3)诱饵基因的酵母双杂交自激活检验;

4)酵母双杂交文库筛选;

5)酵母细胞内的相互作用验证(酵母回转验证);

6)阳性克隆DNA序列测定;

 服务要求:

客户提供待研究蛋白基本信息(包括蛋白名称、物种信息、GeneID、亚细胞定位、生物学功能等),如果有构建好的表达载体也可以提供。

 

结果提供:

详细的实验步骤、诱饵质粒、western blot结果、酵母图片、电泳图片、测序结果、筛到的猎物蛋白的基本信息。

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