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蛋白质谱定性检测

简介:

蛋白定性检测主要用于鉴定单一组分样品或混合样品中的蛋白种类。样品形式可以是从组织或细胞中提取的蛋白混合物,电泳分离后的单一条带,免疫沉淀富集的蛋白等。蛋白样品经胰酶消化后,使用质谱进行鉴定。其中液质联用质谱平台更适合用于复杂的样品,分辨率与准确性更高。

液质联用的串联质谱法(Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry, LC-MS/MS)鉴定蛋白是蛋白质组学研究的首选平台,特异性强,可靠性高。蛋白经胰酶消化形成的肽段先进入液相色谱进行分离,再进行质谱检测。一级质谱检测多肽分子的大小,然后再将肽段打碎,形成一系列离子,即 N端离子系列( B系列)和 C端离子系列( Y系列)。质谱再检测碎片离子的大小,即二级质谱。将质谱数据与蛋白数据库进行比对,获得肽段的序列,特定的多肽序列对应着特定的蛋白,从而鉴定出待检测蛋白。

 

操作流程:

1、单个蛋白鉴定

1)用于鉴定纯化的单个蛋白的溶液或粉末,或经过 SDS-PAGE的单个条带或二维电泳的单个点。

2)蛋白酶解成多肽。

3)液质联用质谱检测:液相分离多肽,离子化的多肽进入质谱,母离子检测,母离子裂解成一系列子离子,子离子检测。

4)数据库检索。

 

2、全蛋白质组及蛋白混合物的鉴定。

用于鉴定含多种蛋白的混合物,包括

1)全蛋白提取物,根据样品的复杂程度采取不同的策略分离后再进行质谱鉴定。

2)对于全蛋白质组,可以先用SDS-PAGE或者液相色谱分离成15~20个组分,酶切消化成肽段,再使用液质联用质谱鉴定。

3)对于蛋白混合物,可将其直接消化成肽段后,用液相色谱分成15~20个组分,再依次使用液质联用质谱仪鉴定。

4)对于IP实验拉下来的蛋白,可以煮沸后用SDS-PAGE分离成5~10个组分,从胶里面回收消化的多肽后,使用液质联用质谱鉴定。

 

服务要求:

客户提供检测样本。

 

结果提供:

详细的实验步骤、原始图片及结果分析。

 蛋白质谱定量检测

简介:

蛋白质定量,作为后基因组时代的一个非常重要的领域,在生物系统及疾病和医疗领域起到了非常重要的作用。研究和分析差异蛋白则在阐明医药分子、药物靶标筛选及发现和验证蛋白生物标记物等领域起到了重要的一环。除了传统的2D-PAGE鉴定差异蛋白以外,近些年来,质谱技术已经日新月异,成为了蛋白相对和绝对定量的关键手段。其中研究蛋白相对和绝对定量的常用质谱分析技术是同位素标记,包括如SILAC、LIT及较新的技术iTRAQ等。

近些年来,另外一种技术是—蛋白质非标记标记技术(Label free)越来越受到关注,它克服了传统的同位素标记的缺点,即过高的样品浓度, 复杂的实验方案及价格过高的原料等,该方法具有速度更快,更简洁及更简明的结果等优点,大有取代同位素标记技术。

 

操作流程:

1、蛋白提取。

2、蛋白酶切消化成肽段。

3、采用液相色谱-质谱联用法鉴定。

4、信息分析。

 服务要求:

客户需提供足量的检测样本。

结果提供:

详细的实验步骤、原始图片及结果分析。

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