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一、CCK8检测

简介

Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为:该试剂中含有WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan dye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

 

用途:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验、生物因子的活性检测

操作流程:

  1. 接种细胞:取对数生长期的细胞,用生长培养基配成单个细胞悬液,以1000-10000个细胞接种到96孔板,每孔100ul;
  2. 培养细胞:细胞接种后贴壁大约需要培养2-4小时,如果不需要贴壁,这步可省去;
  3. 细胞处理:根据试验目的和要求决定培养条件和时间;
  4. 呈色:每孔加入10ul CCK8,由于每孔加入CCK8量比较少,有可能因试剂沾在壁孔而带来误差,建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。或者直接配制含10%CCK8的培养基,以换液的形式加入;
  5. 培养1-4小时:细胞种类不同,形成的Formazan的量也不一样。如果显色不够的话,可以继续培养,以确认最佳条件。特别是悬浮细胞形成的Formazan很少,需要较长的显色时间(5-6小时)。
  6. 测定450nm吸光度:建议采用双波长进行测定,检测波长450-490nm,参比波长600-650nm。

服务要求:

客户提供样本基本信息。

结果提供:

详细的实验步骤、原始数据和图片、结果分析。

 

二、RTCA

简介

实时无标记动态细胞分析技术(RTCA,Real Time Cellular Analysis)是通过特殊工艺,将微电子细胞传感器芯片整合到细胞检测板的底部,用以构建实时、动态、定量跟踪细胞形态和增殖分化等改变的细胞阻抗检测传感系统。当贴壁生长在微电极表面的细胞引起贴壁电极界面阻抗的改变时,这种改变与细胞的实时功能状态改变呈相关性,通过实时动态的电极阻抗检测可以获得细胞生理功能相关的生物信息,包括细胞生长、伸展、形态变化、死亡和贴壁等。

操作流程:

1、向E-Plate检测板中加入培养基并测定背景阻抗值。
2、收集对数期细胞并计数,调整细胞悬液浓度,向E-Plate检测板中加入一定体积的细胞,室温超净台内放置30min。
3、将加入细胞的E-Plate检测板放入检测台上(检测台预先放入培养箱中),  进行实时动态的细胞增殖检测。
4、过夜检测后,向各培养孔中加入配制好的梯度药物并继续进行实时动态检测, 即可获得化合物介导的细胞效应曲线及不同时间段IC50值。

服务要求:

客户提供样本基本信息。

结果提供:

详细的实验步骤、原始数据和图片、结果分析。

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