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一、Transwell检测

简介:

Transwell实验主要是利用一类有通透性的杯状装置(transwell小室)实现对细胞迁移及侵袭的检测。该技术的主要材料为transwell小室,其外形为一个可放置在孔板里的小杯子,杯子底层有一张具有通透性的膜。小室内为上室,培养板内为下室。细胞接种于上室,在下孔室加入血清或其他趋化因子,由于聚碳酸酯膜的通透性,下层培养液的成分可影响到上室内的细胞,从而可研究下层培养液成分对细胞生长、运动等的影响。
 

操作流程:

本公司提供如下方面研究:
1.共培养                   孔径<3.0um
研究下室细胞B代谢物(分泌物)对上室细胞A的影响。


2.细胞趋化               孔径可选择5.0、8.0、12.0µm
研究进入下室的细胞量,反映下室成分对上室细胞的趋化能力


3.细胞迁移               孔径常选择8.0、12.0µm
研究进入下室的细胞量,反应上室细胞的迁移能力


4.细胞侵袭               孔径常选择8.0、12.0µm,膜上室侧铺有基质胶,
研究进入下室的细胞量,反映上室细胞的侵袭能力
 
(一)细胞侵袭实验(transwell 
1.  Transwell小室准备
1)无基质胶Transwell小室制备

包被基底膜:
A. Matrigel (50mg/L)按1:8稀释,无血清培养基作为稀释液
B. 取适量加入Transwell小室中(24孔板transwell小室加100 ul),4℃操作。
C. 37℃培养箱中,孵育4-5h(>5h);出现“白色层”时,说明已经变为固态。


2)有基质胶Transwell小室制备
A. 小室放入培养板中,上室加入300µl预温的无血清培养基
B. 室温下静置15-30min,使基质胶再水化
C. 再吸去剩余培养液。


2.细胞悬液准备
1)消化、收集细胞;
2)PBS洗1-2次
3)用含BSA的无血清培养基重悬(细胞密度约在1-10×105/ml)。
 
3. 细胞接种
1)取适量细胞悬液加入Transwell小室(按transwell说明)。24孔板小室一般200µl。
2)24孔板下室一般加入500µl含FBS或趋化因子的培养基。注意避免气泡产生(下层培养液和小室间)
3) 培养细胞:常规培养12-48h(主要依细胞侵袭能力而定)。


4. 采用直接计数法、MTT法或结晶紫法进行统计分析。

 (二)细胞迁移实验(Transwell)
过程与Transwell侵袭实验基本一致,不同的只是不需要铺Matrigel。
 

服务要求:

客户提供样本基本信息。

结果提供:

详细的实验步骤、原始数据和图片、结果分析。

二、RTCA技术

简介:

实时无标记动态细胞分析技术(RTCA, Real Time Cellular Analysis)可实现实时、动态、定量跟踪细胞迁移及浸润的动力学检测。该技术采用特殊工艺,将微电子细胞传感器芯片整合到细胞浸润迁移板(CIM Plate)的微孔膜下层。当细胞受到下室趋化因子的影响而穿过微孔膜并贴壁生长于微电极表面时,通过对电极阻抗值的检测从而便利并精确地实现对细胞迁移及浸润的检测,可实现实时、动态、定量的细胞迁移及浸润动力学检测。

实时监测不同浓度的matrigel对Hela细胞浸润结果

操作流程:

1、取出CIM Plate检测板,上室包被一定浓度的matrigel,CO2培养箱中放置约4小时。(细胞浸润实验所需,迁移实验无此步骤)
2、下室加入含血清或其它趋化因子的培养基,以加入无血清的培养基为对照。上下室装配后,上室中加入无血清培养基并在CO2培养箱中平衡1小时。
3、将CIM Plate检测板放入检测台上(检测台已预先放入CO2培养箱中),测定背景阻抗值。
4、将一定浓度梯度的细胞接种到CIM Plate检测板的上室里,室温放置半小时。
5、将CIM Plate检测板放入检测台上,即可获得细胞迁移或浸润的实时动力学曲线。

 

服务要求:

客户提供样本基本信息。

结果提供:

详细的实验步骤、原始数据和图片、结果分析。

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