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简介:

单核苷酸多态性(SNP)是指有单个核苷酸替代、插入或缺失而形成的分子形态。SNP是人类基因组中数量最多的一种多态形式,人类基因组中总共有300万个SNP,平均每1000个碱基中就有一个SNP,是继微卫星之后的第三代遗传标记。对它的研究将帮助我们在疾病相关基因定位,认识人种、人群、个体间的遗传差异,研究基因组结构,研究疾病或耐药性与个体差异的关系等领域进行深入的了解。

操作流程:

  1. PCR-测序法

最经典的方法,通过PCR扩增包含SNP位点的片段,测序获得SNP位点信息,适于调查未知SNP位点和连续分布(1kb以内)的SNP位点信息。

 

  1. PCR-限制性酶切

如果某个SNP位点恰好是限制性酶切位点,则通过PCR、酶切再结合电泳分析不失为一种简单经济的区分方法,适于单个的SNP位点分析。

 

  1. 连接酶检测反应(LDR)分型方法

连接酶只能连接与模板完全互补的两个片段,利用连接酶这一特性,通过对需检测SNP位点上下游设计特异性标记的探针,在连接酶的作用下,当特异性的寡核苷酸探针与互补靶序列DNA完全配对时连接反应得以顺利进行,若寡核苷酸探针与其不完全配对,则连接反应不能进行。最后通过测序仪检测标记的寡核苷酸探针,得到分型结果,是一种简单高效的分型方法,适于样本量和位点数目都不大的SNP分析。

 

  1. Taqman探针法

利用Taqman探针的荧光显色原理,分别设计不同荧光标记的Taqman探针覆盖相应SNP位点,完全匹配的探针得到荧光信号检测相应的SNP基因型。灵敏度高,适合少数位点多样本的SNP扫描。

  1. HRM

用荧光定量PCR中的染料法做出的高分辨率溶解曲线,区分只有单一碱基不同的PCR扩增片段,只能在温控均一度在±0.1℃的仪器中使用。成本低,适合少数位点多样品的SNP扫描。

  1. 质谱法

质谱是带电原子、分子或分子碎片按分子量(质荷比)的大小顺序排列的图谱。质谱仪可通过对物质的分子量(质荷比)进行检测,达到区分、鉴别物质的目的。SNP位点两个等位基因之间存在分子量差异,通过分型实验将差异放大,然后以质谱仪进行检测即可达到SNP分型的目的。适合大样本量、多位点的扫描。

 

服务要求:

1、客户提供准确的基因名称和序列以及SNP位点信息。

2、提供样本的要求:1)血液样品(至少4ml、需加EDTA);2)基因组DNA样品,需-20度保存和运输。

  1. 纯度要求:OD260/280在1.6-1.8之间;OD260/230在1.8-2.2之间。

4、浓度需求:基因组DNA浓度大于100ng/ul。

 

结果提供:

详细实验步骤、原始图片和数据、结果分析。

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